禽流感實驗室檢測技術方案(試行)

央視國際 2004年02月02日 14:54

　　本方案是為指導實驗室檢測禽流感而制定。

　　一、禽流感病毒實驗室安全

　　禽流感病毒檢測的實驗室生物安全應按微生物生物安全分類要求在P3級實驗室進行。

　　二、標本的採集、運送

　　1、採集標本的種類：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血液以及死亡病例的屍檢組織。

　　2、採集標本時間：用於分離病毒的標本應為發病2-3天，最好不超過7天。用於血清檢測標本應採急性期和恢復期的雙份血液。急性期儘早採集，最遲不超過發病後7天，恢復期血清應在發病後14天採集。

　　3、標本的運送：參照中國CDC關於SARS標本運送要求。

　　4、採集時的防護：疑似病例的標本應按照SARS要求。

　　三、檢測程序

　　1、疑似病例咽拭子或含漱液、鼻拭子和屍檢組織

　　(1)病毒分離、鑒定

　　用組織培養和雞胚分離法。具體方法同常規人流感檢測，詳見《全國流感監測方案(試行)》(中疾控發[2003]445號)附件。不同的是雞胚接種一定要用SPF雞胚。

　　雞胚或細胞培養物進一步用HA和HI試驗鑒定，方法見(中疾控發[2003]445號)附件。試驗試劑用WHO提供的試劑盒。

　　經HI試驗H5抗體陽性者報送國家流感中心。HA陽性HI試驗H5陰性，也送國家流感中心。

　　(2)RT-PCR或實時RT-PCR試驗

　　該方法可作為早期實驗室診斷的參考依據。可和病毒分離培養同時進行幫助早期判定。

　　2、疑似病例血清的檢測

　　(1)感染早期的血清標本

　　用於病毒分離培養方法同上。同時要留部分作為雙份血清的急性期血清備用。

　　(2)感染7天以後的血清標本

　　與急性期血清配對同時做HI試驗檢測，方法見(中疾控發[2003]445號)附件。

　　3、常規檢測中可疑標本

　　在常規流感監測中實驗室發現HA陽性而血清HI，H3和B型血清皆不抑制標本，應用H5試劑盒做鑒定。

　　四、檢測結果

　　1、分離到病毒，HI試驗H5抗體陽性或同時PCR試驗H5陽性，可報禽流感H5型陽性，送國家流感中心復核。

　　2、分離到病毒，HI試驗H5抗體陰性，PCR試驗H5陽性者，原始標本送國家流感中心進一步檢測。

　　3、恢復期H5抗體較急性期抗體4倍增高，可報禽流感H5型陽性，送國家流感中心復核。

　　4、HA 陽性但HI試驗H5陰性，有條件的省需進一步做中和實驗確定。無條件的省送鄰近省或國家流感中心進一步確定。